Аналіз кривої плавлення з високою роздільною здатністю Коли в зразку присутня суміш ДНК дикого типу та мутантної ДНК, утворюються гетеродуплекси, які можна виявити за допомогою повільне підвищення температури до 95°C у присутності флуоресцентного барвника, який переважно зв’язується з дволанцюговою ДНК.

Інтерпретація цієї кривої ґрунтується на припущенні, що амплікон знаходиться в 1 із 2 основних станів, дволанцюговому або одноланцюговому, тобто коли дцДНК починає плавитися, вона швидко розпадається без проміжного стану. Це часто спостерігається, і тому дозволяє просте загальне правило.

Аналіз кривої плавлення виконується після запуску кПЦР і служить для переконайтеся, що флуоресценція, виявлена ​​під час циклу, походить від одного амплікона. Неспецифічний характер SYBR Green як флуорофора робить аналіз кривої розплаву одним із небагатьох способів підтвердити, що відбулося цільове посилення.

Крива плавлення — це не що інше, як мінімальна температура, при якій ваша дволанцюгова ДНК стає одноланцюговою (плавлення). Він повністю заснований на складі нуклієвої кислоти (на основі подвійних і потрійних зв'язків). тому технічно їх ніщо не називається прийнятним діапазоном кривої плавлення. все плавиться до 95C.

Аналіз кривої плавлення оцінка характеристик дисоціації дволанцюгової ДНК при нагріванні. Коли температура підвищується, подвійна нитка починає дисоціювати, що призводить до підвищення інтенсивності поглинання, гіперхромності.

Часто використовуються температури плавлення характеризувати органічні та неорганічні кристалічні сполуки та з’ясовувати їх чистоту. Чисті речовини плавляться при високій, чітко визначеній температурі (дуже малий температурний діапазон 0,5–1 °C), тоді як нечисті, забруднені речовини зазвичай мають великий інтервал плавлення.

Діаграми температур плавлення Крайня ліва сторона графіка представляє зразок, який є чистою сполукою «A», тоді як крайня права сторона графіка представляє зразок чистої сполуки «B». Лінії позначають температуру переходу тверде тіло в рідину (точки плавлення).